NGS

Мы увеличиваем ваши шансы на успех в ЭКО с помощью секвенирования нового поколения, NGS (секвенирование следующего поколения).

В нашей статье мы постарались дать ответы на вопросы о NGS и PGS.

1. Что такое преимплантационный генетический скрининг (ПГС)?

Всего у здорового человека 22 хромосом, 1 пары аутосомных (2, 3, 4, 22,….., 2) и 46 определяющие пол гонадные хромосомы (XX или XY). Яйцеклетка и сперматозоид, являющиеся половыми клетками, имеют 22+Х или 22+Y, т. е. по 23 хромосомы, а особи с 23 хромосомами образуются путем слияния половых клеток, содержащих 46 хромосомы. Самой ранней фазой развития человека является эмбриональное развитие, и этот период можно наблюдать в течение примерно 5-6 дней при экстракорпоральном оплодотворении.

Но всегда ли эмбрионы содержат 46 хромосом?

К сожалению, на этот вопрос мы вынуждены ответить нет. Эмбрионы, развивающиеся как нормально, так и in vitro, могут содержать числовые или структурные хромосомные аномалии, и эти аномалии часто могут вызывать ранний выкидыш или проблемы со здоровьем у развивающегося ребенка, совместимые или несовместимые с жизнью.

Выявление числовых аномалий (анеуплоидий) и структурных аномалий (транслокаций, делеций и инверсий), которые могут возникать у эмбрионов, в настоящее время возможно с помощью методов преимплантационного генетического скрининга (ПГС). У эмбрионов, полученных методами экстракорпорального оплодотворения, можно исследовать анеуплоидию методом ПГС, другими словами, 46 хромосом. Метод ПГС помогает обнаружить хромосомно нормальный эмбрион и получить высокие показатели сохранения беременности при переносе этого эмбриона.

Короче говоря, метод PGS позволяет исследовать эмбрионы перед переносом на предмет хромосомных анеуплоидий и транслокаций.

Самый современный из эффективных генетических скрининговых тестов на ПГС в нашем центре. Метод секвенирования следующего поколения (NGS) используется. С помощью метода NGS анеуплоидный скрининг эмбриона может быть выполнен с точностью не менее 1% в небольшом количестве (5-95) клеток, взятых у эмбрионов методом биопсии эмбриона. Биопсия эмбрионов может быть выполнена на эмбрионах выше определенного качества, которые могут достичь стадии бластоцисты. По этой причине лабораторные условия должны быть достаточными для обеспечения условий культивирования эмбрионов бластоцисты.

2. Каковы преимущества PGS и кому она рекомендуется?

Эмбрионы, полученные при ЭКО, оценивают по критериям, определенным в соответствии с их морфологическими особенностями развития, и пытаются добиться здоровой беременности путем переноса эмбриона с лучшими характеристиками развития в матку. Изучение особенностей развития зародыша под микроскопом не дает нам информации о том, является ли зародыш хромосомно нормальным или аномальным. Эту информацию можно получить только при генетическом скрининге с ПГС. Даже если эмбрионы очень высокого качества, они могут содержать некоторые хромосомные проблемы, такие как анеуплоидия, и эти проблемы могут привести к раннему выкидышу, некоторым структурным дефектам развивающегося плода или неспособности эмбриона прикрепиться к матке.

Основной целью применения ПГС у эмбрионов является повышение адгезии эмбриона к матке путем переноса хромосомно нормального эмбриона в матку, снижение возможности выкидыша, который может развиться после прикрепления, и, в конечном счете, повысить вероятность рождения здорового ребенка у пар.

Итак, кому следует предлагать PGS?

Известно, что более 50% самопроизвольных абортов имеют хромосомное происхождение, происходящее у эмбрионов. Этот показатель особенно возрастает у пожилых женщин и мужчин с очень низким количеством сперматозоидов (тяжелое мужское бесплодие).

В нашем центре особенно по указанным показаниям рекомендуется ПГС на основе NGS. Потому что частота хромосомных проблем выше у эмбрионов, развивающихся в парах с этими показаниями.

• Особенно женщины с преклонным возрастом матери старше 35 лет.
• Женщины с привычными выкидышами по неизвестной причине
• Женщины, которые не забеременели, несмотря на перенос эмбрионов хорошего качества в 2 или более испытаниях ЭКО
• Мужчины с очень серьезными числовыми и морфологическими проблемами со значениями спермы
• Мужчины или женщины с гонадным мозаицизмом
• Пары, у которых причиной невынашивания беременности является хромосомная проблема у ребенка/плода
• Пары со структурными хромосомными проблемами, такими как транслокация, инверсия

3. Каковы преимущества преимплантастонного генетического скрининга с NGS?

Низкий уровень ложноположительных или ложноотрицательных результатов ниже 5%.

· Более высокая точность NGS в сравнительных исследованиях с Array cGH (сравнительный генетический скрининг).

· Способность обнаруживать мозаицизм, который может развиться у эмбрионов.

· Способность обнаруживать дисбалансы (транслокации, инверсии и делеции) в хромосомах со всеми хромосомами одновременно.

· Позволяет митохондриальный скоринга (mitoscoring).

Сокращает период рождения здорового ребенка, поскольку предотвращает выкидыши, которые могут возникнуть во время беременности из-за хромосомных аномалий.

 Часто задаваемые вопросы

1. Какие процедуры делают эмбриону при НГС и вредят ли эти процедуры эмбриону?

Предимплантационная генетика на основе NGS предпочтительно применяется к эмбрионам, достигшим стадии бластоцисты. Метод биопсии эмбриона для NGS требует удаления только нескольких клеток из клеток трофобласта, которые будут дифференцироваться и образовывать плаценту после того, как эмбрион достигнет стадии бластоцисты. Эмбрионы пытаются определить хромосомно путем генетического анализа, сделанного в этих клетках.

Эмбрион достигает стадии бластоцисты самое раннее, на 5-й день после сбора яйцеклетки. В таких случаях, как преклонный возраст матери и тяжелое мужское бесплодие, скорость развития эмбрионов может замедляться, и поэтому для достижения эмбрионами стадии бластоцисты может потребоваться 6 или даже 7 дней. Медленное развитие не увеличивает риск хромосомной анеуплоидии у эмбрионов, в этот момент решающее значение имеет качество развития эмбриона.

Эмбрионы также пригодны для биопсии на 3-й и 4-й день. Однако в этот период зародыши могут быть мозаичными. Другими словами, некоторые клетки могут быть хромосомно нормальными, а некоторые могут быть хромосомно аномальными. Эмбрионы такого типа могут в будущем скорректировать себя своими способностями к самокоррекции-самокоррекции и превратиться в эмбрионы с совершенно нормальным хромосомным строением. Если биопсию эмбриона провести в раннем периоде, возрастает вероятность дать ложноотрицательный результат, то есть принять нормальный эмбрион за аномальный. Поэтому биопсия эмбрионов на стадии бластоцисты является наиболее точным подходом.

Метод биопсии эмбриона проводится под микроскопом специальными пипетками и эмбриологами, имеющими подготовку и опыт в этой области. Процесс занимает короткое время и не наносит вреда эмбриону. После биопсии эмбрионы индивидуально замораживают с использованием метода сверхбыстрой заморозки — витрификации. Менее 5% всех эмбрионов могут испытывать частичную потерю жизнеспособности или полное разрушение/потерю жизнеспособности после замораживания-оттаивания.

Опубликованные исследования показали, что врожденные дефекты у новорожденных, перенесенных после ЭКО после проведения биопсии и замораживания-оттаивания, увеличиваются, по сравнению с младенцами, перенесенными ЭКО без биопсии эмбриона, что привело к рождению. не показано.

2. Какие генетические дефекты можно обнаружить с помощью PGS на основе NGS?

Прежде всего, следует отметить, что ПГС на основе NGS является методом преимплантационного генетического скрининга и может использоваться для выявления числовых и структурных дисбалансов в хромосомах. Этот тест также имеет определенный предел. ПГС на основе NGS для скрининга анеуплоидии не может выявить особенно семейные заболевания с одним геном и не может исключить однородительскую дисомию, хромосомный дисбаланс, включая делеции и дупликации менее 6 Мб (мегабаза). Кроме того, ПГС может обнаруживать некоторое увеличение хромосомного набора, полиплоиды, но не может определить, что эмбрион является полиплоидным в полиплоидах, где половые хромосомы находятся в их нормальных кратных (триплоидия 69, XXX и тетраплоид 92, XXXX или 92, XXYY), он предполагает нормальный .

3. Какова вероятность нормального вынашивания после НГС-ПГС и наступления беременности с переносом нормального эмбриона по возрастным группам?

Известно, что вероятность хромосомно нормальных эмбрионов снижается с возрастом. По этой причине частота наступления беременности резко снижается из-за увеличения возраста женщин, особенно в исследованиях ЭКО без ПГС. В анализах, проведенных с помощью NGS-PGS у женщин в возрасте до 40 лет, вероятность того, что эмбрионы являются нормальными, составляет 60-40%, в то время как в группе старше 20 лет этот показатель резко падает ниже XNUMX%.

Частота наступления беременности ниже 20% может быть получена при переносе эмбриона без генетического скрининга с помощью NGS у женщин старше сорока лет, в то время как частота наступления беременности, близкая к 40-50%, может быть получена при переносе эмбриона, диагностированного как хромосомно нормальный с НГС.

4. Если беременность наступает в ходе испытания экстракорпорального оплодотворения, в ходе которого был перенесен эмбрион с ПГС, рекомендуется ли по-прежнему пренатальное генетическое тестирование?

Хотя точность метода PGS на основе NGS, в котором выполняется числовой и структурный анализ хромосом, очень высока, тест все же имеет возможность не обнаруживать некоторые проблемы и ложноположительные результаты. Таким образом, инвазивные или неинвазивные пренатальные тесты могут быть применены для точности теста ПГС или для выявления других генетических аномалий, которые не могут быть обнаружены тестом ПГС и могут развиться во время беременности, по рекомендации врача, проводящего вашу беременность. следовать за.